اخیراً تولید پلیالکترولیت کمپلکسها توسط یکی از اساتید دانشگاه علوم پایه زنجان مورد تحقیق و بررسی قرار گرفته است. پلیالکترولیت کمپلکسها (PEC)، موادی هستند که در اثر برهمکنشهای الکترواستاتیک میان دو یا چند پلیمر با بارهای مخالف تشکیل میشوند. از این مواد میتوان به عنوان حاملهای دارویی در حوزه پزشکی استفاده نمود.
بنده زهرا محمدنیا استادیار دانشگاه تحصیلات تکمیلی علوم پایه زنجان هستم و جناب آقای سهیل امانی دانشجوی فارغ التحصیل کارشناسی ارشد رشته شیمی پلیمر دانشگاه تحصیلات تکمیلی علوم پایه زنجان، دانشجوی اینجانب هستند که در این پروژه نیز حضور داشتند.
به ترکیبات پلیمری که در pH خنثی دارای مجموعهای از بارهای مثبت و یا منفی هستند، پلیالکترولیت گفته میشود. بسیاری از مواد بهدلیل داشتن گروههای یونی مثبت یا منفی روی سطح خود بهعنوان پلیالکترولیت قابلتوجه هستند. پلیالکترولیت کمپلکسها (PEC) در اثر برهمکنشهای الکترواستاتیک میان دو یا چند پلیمر با بارهای مخالف تشکیل میشوند. پلیمرهای مورد استفاده برای تهیه پلیالکترولیت کمپلکسها، میتوانند دارای منشأ طبیعی یا سنتزی باشند.
پلیالکترولیت کمپلکس در نتیجه برهمکنشهای الکترواستاتیک قوی بین حداقل دو پلیالکترولیت با بارهای ناهمنام تشکیل میشود. از نظر کمی، پلی الکترولیتکمپلکسها به دو دستهی استوکیومتری و غیراستوکیومتری تقسیم میشوند. در حالت استوکیومتری نسبت اکیمولار پلیمرها با هم برابر است اما در حالت غیراستوکیومتری اکیمولارهای یک پلیمر نسبت به دیگری بیشتر است. در حالت غیراستوکیومتری، آبدوستی کمپلکس و انحلالپذیری آن بالاتر است. کابونو و ززین در سال ۱۹۸۴ اولین محققانی بودند که تشکیل پلیالکترولیتکمپلکس را از نظر جنبشی مورد مطالعه قرار دادند. آنها گزارش کردند که تشکیل PEC در کمتر از ۵ میلیثانیه اتفاق میافتد. آنها سه مرحله اصلی را در مکانیسم تشکیل پلیالکترولیت کمپلکس در نظر گرفتند شامل:
آ) تشکیل کمپلکس اولیه بینظم
ب) تشکیل پیوندهای جدید در داخل کمپلکس و ایجاد کمپلکس ثانویه منظم
ج) تجمع بینکمپلکسی
در گام اول بلافاصله بعد از اختلاط محلولهای پلیمری با بارهای ناهمنام، نیروهای پیوندی ثانویه مانند برهمکنشهای الکترواستاتیک بین بارهای ناهمنام ایجاد شده و یک کمپلکس بینظم تشکیل میشود که این مرحله بسیار سریع رخ میدهد. در گام دوم که تقریباً یک ساعت به طول میانجامد تشکیل پیوندهای جدید در داخل کمپلکس ادامه یافته و یا انحرافات موجود در زنجیرهای پلیمری تصحیح شده و کمپلکس ثانویه با آرایش منظم از زنجیرهای پلیمری ایجاد میشود. در گام سوم برهمکنشهای آبگریز بین کمپلکسهای ثانویه منظم، موجب حالت تودهای و تجمع پلیالکترولیت کمپلکس خواهد شد. پلیالکترولیت کمپلکس تشکیلشده در حلالهای معمولی، نامحلول و نسبت مولی پلیمرها در توده تقریباً برابر واحد است.
همانطور که فرمودید پژوهشگران معتقد هستند که تشکیل پلی الکترولیت کمپلکس، آنتروپی محور است. این مفهوم بدان معناست که بار مخالف پلی الکترولیتها در محیط آبی با یکدیگر به علت جاذبه الکترواستاتیک قوی منجر به تشکیل پلی الکترولیت کمپلکس میشود. این روند باعث افزایش در آنتروپی(بی نظمی) سیستم به علت آزاد شدن یا انتشار کوچک یونهایی که در اطراف پلی یونها(پلی الکترولیت) قرار گرفتهاند میشود. یک بیان ساده برای واکنش تشکیل پلیالکترولیت کمپلکس در زیر نشان داده شده است.
پلیمر طبیعی آلژینات با پلیمر سنتزی پلی (۳-آکریلامیدوپروپیل) تری متیل آمونیوم کلراید بعنوان پلی الکترولیت کمپلکس در این پژوهش سنتز و مورد بررسی قرار گرفت. در این پژوهش برای اولین بار برهمکنشهای الکترواستاتیک مابین آلژینات و پلی (۳-آکریلامیدوپروپیل) تری متیل آمونیوم کلراید با استفاده از اسپکتروسکوپی UV-vis مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که جذب با میزان برهمکنش بین دو ماده پلی الکترولیت رابطهی مستقیمی دارد.
ما برای اطمینان از نتایج تکنیک UV-vis برای بهینه کردن کمپلکس پلی الکترولیت مابین آلژینات و پلی (۳-آکریلامیدوپروپیل) تری متیل آمونیوم کلراید، آن را با نتایج حاصل از DLS و پتانسیل زتا مورد ارزیابی قرار دادیم و با انطباق نتایج UV-vis ،DLS و پتانسیل زتا توانستیم یک روش جدید برای بهینه کردن کمپلکس پلی الکترولیت ارائه دهیم. در تشکیل پلی الکترولیت کمپلکس، عوامل مختلفی چون چگالی بار، غلظت نمک، غلظت پلیمر، pH، قدرت یونی، نسبت اختلاط و جرم مولکولی دخیل است. ما در پژوهش حاضر تاثیر عواملی مانند غلظت نمک، غلظت پلیمر، pH و نسبت اختلاط همچنین تاثیر pH بر روی تشکیل کمپلکس و اندازه و پتانسیل زتا را مورد بررسی قرار دادیم.
از برهمکنش پلیآنیون و پلیکاتیون در محلول سه نوع ساختار مختلف ایجاد میشود؛
آ) محلول در آب
ب) کلوییدهای پایدار
ج) سیستم های دو فازی
تجمعات محلول در آب در مقیاس مولکولی زمانی تشکیل میشوند که پلیالکترولیتها با گروههای یونی ضعیف و اختلاف زیاد در جرمهای مولکولی در نسبتهای غیراستوکیومتری با هم مخلوط شوند. (برای مثال زمانیکه نسبت گروههای عاملی کاتیونی به آنیونی بزرگتر یا کوچکتر از ۱ باشد) غلظت نمکهای محلول و نسبت بار پلیالکترولیتها دو عامل تأثیرگذار در پایداری کمپلکسهای محلول در آب هستند. در قدرتهای یونی متوسط یا پایین در محلولهای بسیار رقیق و شرایط غیراستوکیومتری تجمعیافتن در سطح کلوییدی متوقف شده و کلوییدهای پایدار PEC تشکیل میشود. در این سیستم ذرات PEC معلق هستند و پراکنش نور نشان میدهند.
اختلاط محلولهای بسیار غلیظ از پلیالکترولیتهایی با جرم مولکولی مشابه یا بالا در نسبت استوکیومتری نزدیک به هم، موجب تشکیل سیستم دو فازی شامل یک فاز مایع و یک فاز غنی از پلیالکترولیت کمپلکس میشود. این سیستم دوفازی بعد از شست و شو و خشککردن به آسانی به صورت جامد جدا میشود. خواص رئولوژیکی فاز غنی از پلیالکترولیت به خصوصیات پلیالکترولیتها و غلظت نمک وابسته است. با توجه به معرفی پلی الکترولیت از نظر ساختار در محلول آبی، کمپلکس پلی الکترولیت تهیه شده در این پژوهش از نوع کلوییدهای پایدار نامحلول است.
اصلیترین مزیت پلیالکترولیت کمپلکسها عدم استفاده از حلالهای آلی برای تشکیل توده کمپلکس است. در سایر روشهای کپسوله کردن پروتئینها مانند امولسیون، از پلیمرهایی مانند PLGA به عنوان حامل همراه با حلالهای آلی استفاده میشود. برای جدایی حلال آلی از این سیستمها از روش جدایی فازی استفاده میشود که ممکن است پروتئینهای حساس، غیرفعال یا اکسید شده و عملکرد خود را از دست دهند. پلیالکترولیت کمپلکسها به عنوان سیستمهای حامل پروتئین، دارو و ژن میتوانند این مشکلات را حل کنند و روشی مؤثر برای پروتئین رسانی با قابلیت سازگاری بالا ارائه دهند. از مهمترین کاربردهای پلیالکترولیت کمپلکسها میتوان به دارو رسانی، پروتیین رسانی، ژن رسانی، رهایش واکسن، مهندسی بافت و تهیه غشا اشاره کرد. اخیراً کاربرد این ترکیبات در تهیه باتریهای لیتیومی نیز گزارش شده است.
هدف ما در این پژوهش کاربردهای بیولوژیکی از جمله دارورسانی است. امروزه تقاضای روز افزونی برای گسترش سیستمهای دارورسانی بهمنظور هدف قراردادن سایتهای خاص، غلبه بر تخریب دارو و کاهش اثرات جانبی وجود دارد. در این میان روشهای مختلف رهایش کنترلشدهی دارو به یک زمینهی بهسرعت در حال رشد برای داروهای مدرن تبدیل شده است. رهایش کنترلشده، دارای مزایای بسیاری مانند افزایش کارایی دارو، کاهش سمیت، و راحتی مصرف بیمار است.
تاکنون انواع سیستمهای تحویل دارویی برای مثال نانوحاملهایی بر پایه پلیمرهای آلی سنتزی، میسلها و انواع کریستالهای مایع، لیپوزمها، نانوکپسولهای پلیمری، مواد فعال زیستی مانند کیتوسان، طلا، نانوذرات اکسید آهن توسعه یافته اند. در نتیجه تلاش برای توسعه سیستمهای تحویل داروی هوشمند یا جایگزینهای درمانی برای کاهش عوارض جانبی داروها در بسیاری از موارد بهشدت مورد نیاز است. پیشرفتهای اخیر در سیستمهای رهایش دارو بیشتر بر پایه نوآوری در طراحی نانوذرات، نوآوری در ساخت مواد زیستی و نانو ذرات هدف است. یکی از سیستمهای حامل دارویی که اخیراً توجه بسیاری از پژوهشگران را بهخود معطوف نموده است پلیالکترولیت کمپلکسها (PEC) هستند. پلیالکترولیت کمپلکسها بهعنوان حاملهای جدید پلیمری امروزه برای رهایش هدفمند داروها، ماندگاری و کنترل سرعت رهایش آنها و در نتیجه طولانیتر شدن عمل درمانی بهطور گسترده استفاده میشوند. زیست سازگاری بالا، زیست تخریب پذیری عالی، عدم سمیت، هزینه و مصرف انرژی کم از مزایای پلی الکترولیت کمپلکسها است. همچنین عدم تولید محصولات جانبی سمی، گنجایش و بازده بالای دارو در داخل پلیالکترولیت کمپلکس و کمترین خطر ممکن به دارو در طول تشکیل کمپلکس، استفاده از این سیستمها را برای کاربردهای بیولوژیکی هموار میکند.
پلی (۳-آکریلامیدو پروپیل) تری متیل آمونیوم کلراید (pAPTMACl) به روش پلیمریزاسیون محلول در حضور آغازگر آمونیوم پرسولفات تهیه شد. جرم مولکولی پلیمر سنتزی به روش ویسکومتری تعین شد. در این کار اختلاط بین آلژینات و پلی (۳-آکریلامیدو پروپیل) تری متیل آمونیوم کلراید ، در نسبتهای حجمی مختلف به روش اختلاط ساده انجام شد. تأثیر عواملی مانند pH، قدرت یونی، غلظت پلیمرها، نسبت اختلاط بر برهمکنش بین (ALG/pAPTMACl) با استفاده از روشهای UV-Vis، DLS، و زتا پتانسیل مطالعه شد. محلول آلژینات و محلول ۳-(آکریلامیدوپروپیل)تری متیل آمونیوم کلراید در آب مقطر تهیه شد. پلیالکترولیت کمپلکس به وسیله اضافهکردن محلول پلیمری کاتیونی به آلژینات در دمای اتاق تحت همزدن انجام شد.
از روشهای متنوعی مانند روش محلول، تیتراسیون پلیالکترولیتها، اختلاط جت، نفوذ حلال، ژلشدن یونی، نانو رسوبگذاری، خود تجمعی لایه به لایه، اکستروژن مذاب داغ، پلیتراکمی بین سطحی و غیره میتوان برای تهیه پلیالکترولیت کمپلکسها استفاده نمود. مهمترین این روشها که ما در این پژوهش استفاده کردیم روش محلول است. این روش بهطور گسترده زمانی که پلیمرهای دارای بارهای ناهمنام قبل از اختلاط بهطور کامل درحلالها و آب حل شوند، استفاده میشود. در اکثر موارد آب به عنوان حلال انتخاب میشود و همین امر امکان استفاده از این روش را در کاربردهای زیستی فراهم میکند و با توجه به اینکه هدف از تهیه پلیالکترولیت کمپلکس در این پژوهش کاربردهای زیستی بود، این روش انتخاب شد.
وزن مولکولی پلیمر بهطور مستقیم با خواص فیزیکی آن ارتباط دارد. وزن مولکولی مطلوب برای هر پلیمر به ساختار شیمیایی و کاربرد آن مربوط میشود. تعیین وزن مولکولی پلیمرها به دو علت پیچیده است، اول اینکه در فرایند پلیمری شدن رشد یکنواخت زنجیرها غیر ممکن است پس باید میانگین وزن مولکولی را در نظر گرفت. دوم اینکه روشهای اندازهگیری وزن مولکولی مانند کاهش نقطه انجماد، افزایش نقطه جوش و تیتراسیون برای پلیمرهای سبک کاربرد دارد. بنابراین باید از روشهای پیشرفتهتر مانند تفرق نور، ویسکومتری، کروماتوگرافی تراوایی ژلی و … برای پلیمرهای با وزن مولکولی بالا استفاده شود. طبق مطالعات انجام شده معمولترین روش اندازهگیری وزن مولکولی پلیالکترولیتها روش ویسکومتری است.
ویسکوزیته ذاتی از مفیدترین شاخصهای ویسکوزیته است، که بهوسیله معادله مارک-هوینگ-ساکوردا با وزن مولکولی ارتباط دارد. وزن مولکولی پلی (۳-آکریلامیدو پروپیل) تری متیل آمونیوم کلراید تهیه شده با روش ویسکومتری و با استفاده از ویسکومترهای آبلود و Cannon-Fenske و جایگذاری نتایج در معادلهی مارک-هوینک-ساکوردا به طور تقریبی g/mol 96000 محاسبه شد.
ابتدا محلول ۱% وزنی پلیالکترولیت در NaCl یک مولار تهیه شد. فرایند حل شدن پلیالکترولیت در دمای ۴۰ درجه سانتیگراد طی ۱ ساعت انجام شد. به منظور کاهش دافعه ناشی از بارهای مثبت در پلیالکترولیت مورد نظر محلولسازی در محلول سدیم کلرید انجام شد. حدود ۶ میلیلیتر از محلول پلیالکترولیت به ویسکومتر اضافه شد. ویسکومتر در حمام آب با دمای ثابت ۲۵ درجه سانتیگراد قرار داده شد. مدت زمان سقوط محلول پلیالکترولیت در فاصلهی بین دو نشان ویسکومتر برای محلولهای ۷۵/۰ درصد، ۵/۰%، ۲۵/۰درصد، ۱۲۵/۰درصد، وزنی/حجمی و همچنین محلول خالص سدیم کلرید اندازهگیری شد. بر اساس تجزیه و تحلیل دادهها براساس زمان سقوط محلول پلیالکترولیت در غلظت های تهیه شده و رسم نمودارهای مربوطه با استفاده از معادلهی مارک-هوینک-ساکوردا ویسکوزیته و وزن مولکولی پلیالکترولیت بهدست آمد. برای افزایش دقت اندازهگیری زمان سقوط محلول پلیالکترولیت بین دو خط نشانه سه بار تکرار و میانگین آنها مشخص شد.
برای پی بردن به نحوهی تأثیر غلظت بر برهمکنشهای الکترواستاتیک و تشکیل کمپلکس مابین آلژینات و (p(APTMACl، غلظتهای مختلفی از پلیمرها تهیه شد. با افزایش غلظت پلیمرها جذب (کدورت) افزایش قابل توجهی را نشان میدهد. با افزایش غلظت، تعداد کوچک یونهای آزاد شده بیشتر شده و در نتیجه این کوچک یونها سایتهای فعال پلیمر را پوشیده کرده و مانند رشتههای ماکارونی روی هم انباشته میشوند و برهمکنشها ضعیف میشود. شدت برهمکنشهای الکترواستاتیک مابین آلژینات و (p(APTMACl تابعی از دانسیتهی بارهای دو پلیمر است و دانسیتهی بارها نیز تابعی از pH است. حضور نمک میتواند جاذبه الکترواستاتیک مابین پلی ساکارید- پلیمر را کاهش دهد. در واقع بهعلت جداکردن شبکه بارها وسعت کمپلکس شدن کاهش مییابد. در قدرتهای یونی بالا یا غلظتهای بالای کوچک یونها (Na+ و Cl–) تمایل برای جداکردن بارهای پلیساکارید-پلیمر و کمپلکس شدن کمتر میشود. قدرتهای یونی کم تأثیر کمتری بر دانسیتهی بارها دارد و در این حالت برهمکنش کافی برای تشکیل کمپلکس وجود دارد. تأثیر غلظت NaCl بر برهمکنشهای الکترواستاتیک دخیل در تشکیل کمپلکس با استفاده از روش UV-Vis بررسی شد و تغییرات جذب (کدورت) ثبت گردید.
در حضور NaCl، یونهای Na+با گروههای (N(CH۳)۳+ p(APTMAClبرای برهمکنش با گروههای–COO– موجود در آلژینات رقابت میکنند. از طرف دیگر یونهای Cl– با گروههای –COO– آلژینات برای برهمکنش با گروههای –(N(CH۳)۳+ p(APTMACl رقابت میکنند. همین عامل منجربه کاهش برهمکنش مابین گروههای –COO– آلژینات و گروههای (N(CH۳)۳+ p(APTMACl میشود. مشاهدات مشابهی در مقالات در مورد برهمکنش پروتئینهای مختلف با پلیساکاریدها گزارش شده است. لیو و همکاران تأثیر غلظت NaCl در جریان کمپلکس شدن مابین پروتئین جدا شده نخود فرنگی و صمغ عربی، را بررسی و مشاهده نمودند که کدورت کمپلکس با افزایش غلظت نمک کاهش مییابد. وین بریک و همکاران و رو و همکاران رفتار مشابهی از پروتئین آب پنیر-صمغ عربی و مخلوط پروتئینهای بوین سرم آلبومین-پکتین مشاهده کردند.
pH محلول پلیمری نقش تعیین کننده و کلیدی در یونیزاسیون گروههای عاملی و درنتیجه دانسیته بار سطح آنها دارد. در این پژوهش به نتایج جالبی رسیدیم pH محلول پلیمری علاوه بر تاثیری که بر روی بار الکتریکی زنجیرهای دارد بر روی کنفورماسیون زنجیرههای پلیمری و در نتیجه بر روی تشکیل پلیالکترولیت کمپلکس تاثیر میگذارد. آلژینات پلیالکترولیتی ضعیف است که با تغییر pH محیط میتوان درجه تفکیک گروههای عاملی و بار الکتریکی روی سطح آن را کنترل کرد. در مقابل (p(APTMACl حساسبه pH نیست و در تمام pH ها دانسیتهی بار مثبت ثابتی دارد. در این تحقیق تشکیل پلیالکترولیت کمپلکس در pHهای مختلف در محدودهی ۱ الی ۱۰ بررسی شد. پتانسیل زتای محلول آلژینات در pHهای ۳ و ۷ به ترتیب برابر با ۵۴/۳- و ۳/۴۰- میلی ولت است. اما پتانسیل زتای پلیمر کاتیونی سنتز شده (p(APTMACl در تمام pHها برابر ۲/۴۲ میلی ولت است. درجهی یونیزاسیون آلژینات ناشی از پروتونه شدن یا پروتون کافت گروههای عاملی–COOH آلژینات است. مطالعه تأثیر بار الکتریکی پلیساکارید- پلیمر برای تشکیل کمپلکس با استفاده از اسپکتروسکوپی جذبی UV-Vis بررسی شد. جذب در اصل مستقیماً متناسب با غلظت مواد مورد استفاده برای تشکیل کمپلکس و همچنین بار الکتریکی زنجیرههای پلی ساکارید-پلیمر است.
در اختلاط ساده محلولهای پلیمری در ۱=pH کمپلکسی تشکیل نمیشود که به دلیل پروتونه شدن گروههای کربوکسیل موجود در آلژینات و عدم وجود برهمکنش است. آلژینات در شرایط ۷=pH دارای بار الکتریکی منفی بیشتری نسبت به ۳=pH (طبق پتانسیل زتا که بالا اشاره شد) است. با این شرایط در ۷=pH گروههای کربوکسیلیک در آلژینات دافعهی بین مولکولی قوی از خود نشان میدهند که کنفورماسیون مولکولی را به صورت خطی و گسترده تغییر میدهد. زمانیکه بار سطحی نسبتاً بیشتر است، مقدار ماده کمتری برای غلبه بر بار سطحی در جریان تشکیل کمپلکس لازم است. از طرفی دیگر، زمانی که آلژینات بار سطحی نسبتاً کمتری دارد (۳=pH طبق پتانسیل زتا که در بالا اشاره شد) اکثر گروههای کربوکسیل آلژینات خنثی بوده و مولکولها تمایل به تاخوردگی و کنفورماسیون درهم دارند. در نتیجه مقدار زیادی (p(APTMACl لازم است که بتواند به داخل زنجیرههای تا خوردهی آلژینات نفوذ کرده و تشکیل کمپلکس بدهد.
آزمایش MMT برای ارزیابی سمیت سلولی نانوذرات (ALG/p(APTMACl روی سلولهای غدد سرطانی لایهی برونی پوست سینه انسانی (MCF-7) انجام شد. نانوذرات تهیه شده روی سلولهای MCF-7 هیچگونه فعالیت ضدسرطانی از خود نشان ندادند.
یکی از جنبههای نوآورانه این پژوهش بررسی برهمکنش پلی الکترولیت کمپلکس ما بین (ALG/p(APTMACl و بهینه کردن آن با استفاده از اسپکتروسکوپی UV-Vis هست.
بله این کمپلکس پتانسیل استفاده در صنایع داروسازی به عنوان نانو حامل دارویی را داراست. مواد فعال میتوانند از طریق چهار روش زیر به ذرات یا کلوییدهای پلیالکترولیت کمپلکس وارد شوند.
الف) وارد شدن از طریق به دام انداختن مواد فعال (موجود در محلول) در رسوب پلیالکترولیت کمپلکس
ب) وارد شدن از طریق جذب مواد فعال (موجود در محلول) در تماس با پلالکترولیت کمپلکس از پیش تهیه شده (به ویژه در مورد مواد متخلخل یا ژلها با خصوصیات اسفنجی)
ج) اتصال شیمیایی مواد فعال به پلیآنیون یا پلیکاتیون یا به هر دو و سپس تهنشینی پلیالکترولیت کمپلکس
د) واردشدن از طریق استفاده از مواد فعال ب هعنوان یک جزء در تشکیل پلیالکترولیت کمپلکس (در این روش ماده فعال حداقل بایستی دارای بار یا گروه قطبی باشد.)
دانشگاه تحصیلات تکمیلی علوم پایه زنجان، ستاد توسعه فناوری نانو
با تشکر از حسن توجه مجله الکترونیکی زیستفن به مقاله ما و انجام مصاحبه با بنده و قرار دادن آن در اختیار جامعه دانشگاهی و علمی کشور، لازم میدانم تاکید کنم با توجه به هزینههای بالا در زمینه نانوفناوری و زیستفناوری، سازمانها و نهادهای ذیربط حمایتهای مادی و تشویقی خود را از پژوهشگران علمی کشور بیشتر کنند
1397/07/05